Beijing CHEJETER Technology Co.,Ltd.

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酵母基因组DNA提取试剂盒说明书

产品信息

产品简介

本试剂盒采用可以特异性结合 DNA  的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取酵母基因组 DNA 。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附 DNA ， 可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组 DNA  片段大，纯度高， 质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组 DNA  可用于各种常规操作，包括酶切、 PCR、文库构建、Southern  杂交等实验。

产品内容

使用方法

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1 、取酵母细胞(不超过 5× 107cel1s) ，12000rpm  离心 1min ，尽量吸除上清。

2、酵母细胞壁的破除：向酵母菌体中加入 470ul  山梨醇 Buffer。充分悬浮菌体，加入 25ul酵母破壁酶和 5ul  巯基还原剂，充分混匀。30℃处理 1-2h ，期间可颠倒离心管混匀数次。

3 、12000rpm  离心 lmin ，弃上清，收集沉淀。

4 、 向沉淀中加入 200ul  溶液 A ，充分悬浮沉淀 ， 向悬浮液中加入 20ul  的 RNaseA(10mg/ml) ，充分颠倒混匀，室温放置 10min。

5 、加入 20ul  的蛋白酶 K(10mg/ml) ，充分颠倒混匀。65℃水浴消化 15-30min ，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。

6 、加入 200ul  溶液 B ，再加入 200ul  无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA  的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，室温放置 2min。

7 、12000rpm  离心 2min ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8 、向吸附柱中加入 600ul  漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇) 。12000rpm  离心 1min ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9 、向吸附柱中加入 600ul  漂洗液， 12000rpm  离心 l min ， 弃废液，将吸附柱放入收集管中。

10 、12000rpm  离心 2min ，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟， 目的是将吸 附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR  等。

11、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置 5min ，12000rpm  离心 l min。

12 、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm  离心 2 min ，即可得到高质量的基因组DNA。

注意事项

1 、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA  片段较小且提取量下降。

2 、若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。

3 、如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。

4、洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的 pH  值对洗脱 效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其 pH  值在 8.0  左右(可用 NaOH  将水的 pH 值调至此范围) ， pH  值低于 7. 0  会降低洗脱效率。DNA  产物应保存在-20℃ ,  以防 DNA 降解。

5 、DNA  浓度及纯度检测：得到的基因组 DNA  片段的大小与样品保存时间、操作过程中 的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA  片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测 浓度与纯度。DNA  应在 OD260   处有显著吸收峰，OD260    值为 1.0  相当于大约 50μg/ml  双 链 DNA 、40μg/ml  单链 DNA 。OD260/OD280    比值应为 1.7- 1.9 ，如果洗脱时不使用洗脱缓 冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为 pH  值和离子存在会影响光吸收值，但并不表 示纯度低。

保存条件

室温(15℃-25℃)  干燥保存，1 年有效；2℃-8℃保存时间更长。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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