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动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒说明书

产品信息

产品简介

本试剂盒采用可以特异性结合 DNA  的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取组织和细胞的基因组 DNA 。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效、 专一吸附 DNA ，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组 DNA  可用于各种常规操作， 包括酶切、 PCR 、文库构建、Southern  杂交等实验。

产品内容

使用方法

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1 、样品的处理：

a 、细胞：取 1×106- 1×107   个悬浮培养细胞，12000rpm  离心 1min  收集细胞，贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理，再用预冷的 PBS  吹打成细胞悬液，然后 12000rpm  离心 1min  收 集细胞，尽量除去上清，加 200ul  溶液 A ，振荡至彻底混匀。

b 、组织：组织量不宜过大，一般不要超过 25mg ，可以使用匀浆器匀浆，最好用液氮研磨成粉末状，再用预冷的 PBS  或无菌水充分悬浮，然后 12000rpm  离心 1min  收集细胞，尽 量除去上清，加 200ul  溶液 A ，振荡至彻底混匀。

2 、向悬浮液中加入 20ul  的 RNase A (10mg/ml) ，55℃放置 15min。

3 、加入 20ul  的蛋白酶 K( 10mg /ml ) ，充分颠倒混匀，55℃水浴消化，细胞消化时间较短，组织消化时间较长，一般需要 1-3  个小时才能完成（鼠尾需要消化过夜）。消化期间可颠倒 离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。消化完全的指标是：液体清亮及粘稠。

4 、加入 200ul  体积溶液 B ，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可放置于 75℃ 15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能导致提取的 DNA  量少及不纯，还有可能导致堵塞吸附柱。

5 、加入 200ul  无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA  的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中。

6 、12000rpm  离心 1min ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7 、向吸附柱中加入 600ul  漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇) ， 12000rpm  离心1min ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8、向吸附柱中加入 600ul  漂洗液，12000rpm  离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9 、12000rpm  离心 2min ，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟， 目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR  等。

10 、将吸附柱放入一个干净的离心管中， 向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul  经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置 5min ，12000rpm  离心 2min。

11 、可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm  离心 2min ，即可得到高质量的基因组 DNA。

注意事项

1 、试剂盒拆封后，RNase A 和蛋白酶 K 需放置-20℃保存。

2 、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。

3 、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。

4 、洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul ，体积过小会影响回收效率：洗脱液的 pH 值对洗 脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值 调至此范围) ，pH  值低于 7.0 会降低洗脱效率。

保存条件

室温(15℃-25℃)  干燥保存，1 年有效；2℃-8℃保存时间更长。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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