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细菌基因组DNA提取试剂盒说明书

产品信息

产品简介

本试剂盒采用可以特异性结合 DNA  的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取细菌基因组 DNA 。离心吸附柱中采用的硅基质材料，能够高效专一吸附 DNA ，可最大限度去除 杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组 DNA  片段大，纯度高，质量稳定可靠。 使用本试剂盒提取的基因组 DNA  可用于各种常规操作，包括酶切、 PCR 、文库构建、Southern  杂交等实验。

产品内容

使用方法

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1 、取细菌培养液 1ml ，12000rpm  离心 1min. ，尽量吸除上清。

2、向菌体中加入 200ul  溶液 A，振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮向悬浮液中加入 20ul的 RNase A (10mg/ml) ，充分颠倒混匀，室温放置 15-30min。

注意：如果是革兰氏阳性菌：可在第 2  步操作前用 200ul  终浓度为 20mg/ml   的溶菌酶 ，37 ℃处理 30 min   以上。（溶菌酶的缓冲液用：20 mM Tris, pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2%TritonX-100）

3 、向管中加入 20ul  的蛋白酶 K(10mg/ml) ，充分混匀，55℃消化 30-60min ，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止，此时可见菌液呈清亮粘稠状。

4 、向管中加入 200ul  溶液 B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于 75℃放置 15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如果溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能会导致DNA 的提取量以及纯度降低，还可能堵塞吸附柱。

5 、向管中加入 200ul  无水乙醇，充分混匀，此时还可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA  的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入到吸附柱中，静置 2min。

6 、12000rpm  离心 2min.  弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7 、向吸附柱中加入 600ul  漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇) 。12000rpm  离心1min ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8 、向吸附柱中加入 600ul  漂洗液， 12000rpm  离心 l min ， 弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9 、12000rpm  离心 2min ，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟， 目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR  等。

10 、将吸附柱放入一个干净的离心管中， 向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul  经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置 5min ，12000rpm  离心 1min。

11、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置 2min  ，12000rpm  离心 2 min ，即可得到高质量的细菌基因组 DNA。

注意事项

1 、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA  片段较小且提取量下降。

2 、若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。

3 、如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。

4、洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的 pH  值对洗 脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其 pH  值在 8.0  左右(可用 NaOH  将水的 pH  值调至此范围) ， pH  值低于 7. 0  会降低洗脱效率。DNA  产物应保存在-20℃ ,  以防 DNA  降解。

5 、 DNA  浓度及纯度检测：得到的基因组 DNA  片段的大小与样品保存时间、操作过程 中的剪切力等因素有关。 回收得到的 DNA  片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检 测浓度与纯度。DNA  应在 OD260 处有显著吸收峰，OD260 值为 1.0  相当于大约 50μg/ml  双 链 DNA 、40μg/ml 单链 DNA 。OD260/0D280  比值应为 1.7- 1.9 ，如果洗脱时不使用洗脱缓冲 液，而使用去离子水， 比值会偏低，因为 pH  值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示 纯度低。

保存条件

室温(15℃-25℃)  干燥保存，1 年有效；2℃-8℃保存时间更长。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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