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琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒说明书

产品信息

产品简介

本试剂盒采用可以高效、专一结合的 DNA  硅基质材料和独特的缓冲液系统，从 TAE  或 TBE  琼脂糖凝胶上回收 DNA  片段，同时除去蛋白质、其他有  机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收 100bp- 10kb  大小的片段， 回收率大于 80%（小于 100bp  和大于 100kb   的 DNA  片段回收率为 30-50%）。 使用本试剂盒回收的 DNA  可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等试验。

产品内容

使用方法

（使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。）

1、琼脂糖凝胶电泳后，将单一的目的 DNA  条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入干净的离心管中，称取重量。

2 、向胶块中加入 3  倍体积溶胶液（如果凝胶重为 0. 1g ，其体积可视为 100ul,则加入 300ul  溶胶液），50-55℃水浴放置 10min ，期间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。

注意：溶胶时，如果溶胶液变为红色（正常情况下为淡黄色），可向含有 DNA  的胶溶液 中加入 10-30ul 3M  醋酸钠（pH5.2）将胶溶液调为淡黄色，否则将会影响 DNA  与吸附 柱的结合，影响回收效率。

3、将上一步所得溶液加入一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12000rpm  离心 30-60  秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。

注意：胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合 DNA  的能力较弱。

4 、向吸附柱中加入 600ul  漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm  离心 1min ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

5 、向吸附柱中加入 600ul  漂洗液，12000rpm  离心 1min ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

6 、12000rpm  离心 2min ，尽量除去漂洗液。将吸附柱敞口置于室温或 50℃温 箱放置数分钟， 目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，防止漂洗液中的乙醇影响后续的实验。

7 、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加适量经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置 2min ，12000rpm  离心 1min。

注意：

1) 、为了增加回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，12000rpm  再次离 心 1min。

2) 、洗脱缓冲液体积不应少于 30ul ，体积过小影响回收效率。

3) 、洗脱液的 pH  值对于洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其 pH值在 7.0-8.5  之间。

8 、DNA 产物-20℃保存。

注意事项

1.  电泳前最好更换成新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。

2.  如下一步实验要求较高，则应尽量使用 TAE  电泳缓冲液。

3.  切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对 DNA  造成损伤。

4.  回收小于 100bp  和大于 100kb  的 DNA  片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。

5.  回收率与初始 DNA  量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。

6.  如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

保存条件

常温干燥保存。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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