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Chejeter 全血基因组 DNA 提取试剂盒说明书

Chejeter Blood Genomic DNA Extraction Kit

产品信息

产品简介

本试剂盒采用可以特异性结合 DNA    的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取全血基因组 DNA 。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料， 能够高效、专一吸附 DNA ， 可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合  物。 提取的基因组 DNA    片段大，纯度高， 质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组 DNA    可用于各种常规操作，包括酶切、  PCR 、 文库构建、Southern    杂交等实验。

产品内容

使用方法

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1  、样品的处理(本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的 0.lmL- 1mL血液样品)：

a 、在血液样品中加入 3    倍体积的红细胞裂解液，充分颠倒混匀，室温放置 2-5min ，12000rpm  离心 2min  ，小心吸去上清，沉淀应为白色或淡红色，如果 裂解不彻底，可重复以上述步骤一次。向沉淀中加 200μL    溶液 A  ，振荡至彻底混匀。

b  、  如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞 为有核细胞，因 此处理量为 5-20μL  ，不需要再用红细胞裂解液处理，直接加200μL    溶液 A  ，振荡至彻底 混匀。

2  、向悬浮液中加入 20μL     的 RNase A ( 10mg/mL)  ，充分颠倒混匀，室温放置 10min。

3 、加入 20μL-30μL    的蛋白酶 K( 10mg /mL )   ，充分颠倒混匀，60℃水浴消化 30-60min ，消 化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。

4  、加入 100μL     的溶液 B   ，充分颠倒混匀，若出现浑浊，可放至 60℃水浴10min。

5  、加入等体积的无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA    的提 取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，室温放置 2min。

6  、12000rpm    离心 2min   ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7  、向吸附柱中加入 600μL    漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)  ，12000rpm    离心 2min  ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8  、向吸附柱中加入 600μL    漂洗液，12000rpm     离心 2min  ，弃废液，将吸附柱放入收集管 中。

9  、12000rpm    离心 2min  ，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附 柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

10  、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200μL经 65℃水浴预 热的洗脱液，室温放置 5min   ，12000rpm    离心 2min。

11  、离心所得洗脱液可再加入吸附柱中，12000rpm    离心 2min   ，即可得到高质量的基因组 DNA。

注意事项

1、本试剂盒置于室温( 15 -25℃)    干燥条件下可保存 12  个月，更长时间的保存可置于 2 -8℃。

2  、常用的血液抗凝剂有 EDTA、ACD  和肝素等，需注意的是，如欲制备大分 子量血液基因 组 DNA  ，  可优先考虑使用 ACD  抗凝。一般不使用肝素抗凝， 因为用肝素抗凝的血液提取 的基因组 DNA  进行 PCR  扩增时，有 PCR  扩增抑制现象。

3  、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA  片段较小且提取量也下降。 

4  、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。

5 、绝大多数哺乳动物全血中的红细胞无核，故在提取基因组 DNA  时需去除不 含 DNA  的无 核红细胞，  以免影响白细胞裂解和 DNA  释放。如果处理的血 样为禽类、鸟类、两栖类或 更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量减少为 5-20μL  ，不需要再用红细胞 裂解液来裂解红细胞。

6、洗脱缓冲液的体积最好不少于 50μL，体积过小会影响回收效率:洗脱液的 pH 值对洗脱效 率也有影响；若需要用水做洗脱液应保证其 pH  值在 8.0  左右(可用 NaOH  将水的 pH  值调至 此范围)   ，pH    值低于 7.0  会降低洗脱效率。

保存条件

RNase A  、蛋白酶 K  于-20 ℃保存；其它试剂室温(15℃-25℃)    干燥保存，保存 12  个月不影 响效果。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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