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TRzol（总 RNA  提取试剂）

TRzol Reagent

产品信息

TRzol（总 RNA  提取试剂）

保存条件

TRzol  在室温下能稳定保存 12  个月。尽管如此， 为达到最佳效果，我们建议保存在 2-8℃下。

重要提示

有毒物接触皮肤或者不慎吞服， 会导致灼伤。 一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感 不适， 看医生并寻求苯酚和其他成分的正确治疗方案。

产品介绍

TRzol 试剂是直接从细胞或组织中提取总 RNA 的试剂。它在破碎和裂解细胞时能保持 RNA 的完整 性。加入氯仿后离心，样品分成水样层、中间层和有机层。RNA 存在于水样层中。收集上面的的水样层 后， RNA 可以通过异丙醇沉淀来回收。

自备试剂

氯仿、异丙醇、 75%乙醇(RNase-Free water 配制)、RNase-Free water（将水加入无 RNA 酶的玻璃瓶 中，加入 DEPC 至 0.1% (V/V)。放置过夜并高压灭菌）。0.5% SDS 溶液(RNase-Free water 配制)（可选）。

操作步骤

1.样品预处理

a.植物组织：以叶片 RNA 提取为例。取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在 TRzol 试 剂中研磨， 研磨要迅速， 最好不要超过 1min。大约 100mg 叶片使用 1ml TRzol 试剂。

b.动物组织：以鼠肝脏 RNA 提取为例。取新鲜或-80℃冻存组织，每 30-50mg 组织加入 1ml TRzol 试 剂，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积一般不要超过 TRzol 试剂体积的 10%。

c.单层生长的细胞： 直接往直径 3.5 cm 的培养板中加入 1ml 的 TRzol 裂解细胞，通过移液管分次移出 细胞裂解物。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的 TRzol 量（每 10cm2 加 1ml）。当 TRzol 量不足时可导致抽提的 RNA 中污染有 DNA。

d.悬浮生长的细胞： 通过离心来沉淀细胞。在 TRzol 试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每 5-10× 106 的动物细胞， 植物或酵母菌细胞或每 1×107 细菌加 1ml 的 TRzol。在加入 TRzol 前应避免洗涤细胞，因 为那样会增加 mRNA 降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。

2.分离阶段

将匀浆样品在 15-30℃件下孵育 5 min 以使核蛋白体完全分解。（可选步骤：4℃ 12,000rpm(13,400g) 离心 10min，取上清。 注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等， 可离心去 除。 离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量 DNA，上清中含有 RNA。处理脂肪组织样品时，上层 是大量油脂，应除去。取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。）每 1ml TRzol 加 0.2ml 氯仿。盖紧样品管盖， 用手用力摇晃试管 15 秒并将其在室温下孵育 2-3 min。4℃ 12,000rpm(13,400g)离心 15 min。离心后混合 物分成三层：下层苯酚-氯仿层， 中间层， 上层无色的水样层。 RNA 存在于上层水样层当中。水样层的容量 大约为所加 TRzol 容量的 60%。

3.RNA 的沉淀

将水样层转移到新的离心管中，如果希望分离 DNA 和蛋白，有机层和中间层同样要予以保留。通过将水 样层和异丙醇混合来沉淀 RNA。每 1ml TRzol 加入 0.5ml 异丙醇， 混匀。将混合的样品在 15-30℃条件下 孵育 10min，4℃ 12,000rpm(13,400g)离心 15 min。RNA 沉淀在离心前通常不可见， 离心后形成一胶状片状 沉淀附着于试管壁和管底。

4..RNA 的漂洗

移去上层悬液。用 75%的乙醇(RNase-Free water 配制)洗涤 RNA 沉淀 1-2 次，每 1ml 的 TRzol 至少加 1ml 的 75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在 2-8℃下以不超过 7,500×g 的离心力高速冷冻离心 5 min。

5.RNA 的再溶解

室温简单干燥 RNA 沉淀，不要在真空管里离心干燥 RNA。尤为重要的是，不能让 RNA 沉淀完全干燥那样 会极大地降低它的可溶性。部分溶解的 RNA 样品其 OD260/OD280 比值<1.6。用移液管分几次移取 RNase- Free water 或 0.5%SDS 溶液(RNase-Free water 配制) 来溶解 RNA（如果 RNA 以后要用于酶切反应时， 避免 使用 SDS。）RNA 还能被 100%甲酰胺（除去离子）再溶解并保存在-80 °C。

注意事项

1.  从少量的组织(1~10mg)或细胞(102- 104  个)中分离 RNA  样品： 往组织或细胞中加入 800µl TRzol。待 样品裂解后，加入氯仿并进行步骤 2  中的抽提操作。在用异丙醇沉淀 RNA  之前， 加入 5~10μg  无 RNA 酶的 glycogen  作为水样层的载体。为降低其黏度在加入氯仿前用 26  号注射器抽吸两次以切断 基因组 DNA 。Glycogen  会留在水样层中并和 RNA  共析出。在浓缩到 4mg/ml  之前它不会抑制逆转 录反应第一链的合成也不会抑制 PCR。

2.  在匀浆化后和加入氯仿之前，样品可以在-60℃或者-70℃保存至少一个月。将 RNA  沉淀溶于 75%的 乙醇在 2-8℃至少可以保存一周，在-5—-20℃下至少可保存一年。

3.  用 TRzol  抽提 RNA  时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸 道吸入。如无例外， 室温保持在 15~30℃的条件下。

保存条件

TRzol 在室温下能稳定保存 12 个月。尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在 2-8℃下。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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