Beijing CHEJETER Technology Co.,Ltd.

Tel:010-82700004

Wed:www.cjt-bio.com

E-mail:finance@cjt-bio.com

AR  细胞增殖和毒性检测试剂盒 (CCK8) 说明书

产品信息

产品介绍

AR  细胞增殖和毒性检测试剂盒 (CCK8) 是一款基于 WST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒，性能和稳定性均能比肩同类进口产品。

WST-8 是一种类似于 MTT 的化合物，在电子耦合剂 1-Methoxy PMS 存在的情况下，可以 被细胞脱氢酶还原生成橙黄色水溶性的甲臜 (Formazan)。生成的甲臜物与活细胞数量成正比， 细胞增殖越快，则颜色越深，对细胞毒性越大，则颜说色越浅，因此可利用这一特性直接进行 细胞增殖和毒性分析。用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。

产品特色

灵敏度高，数据可靠，重现性好

适用范围广，针对贴壁细胞和悬浮细胞，均有良好的表现

无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低

适合于高通量药物筛选

操作步骤

1.  制作标准曲线

a.  先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞；

b.  按比例依次用培养基等比稀释成细胞浓度梯度，一般要做 5-7 个细胞浓度梯度，每组 4-6 个复孔；

c.  接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后每 100 μL 培养基加 10 μL 本品培养一定时间 后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD 值为纵坐标的标准曲线。根据此标 准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致。

2.  细胞活性检测/细胞增殖-毒性检测

a.  在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/孔)，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时；

b.  向培养板加入不同浓度的待测药物；(非必选步骤)

c.  将培养板在培养箱孵育一段适当的时间；(非必选步骤)

d.  向每孔加入 10 μL 的本品 (注意不要产生气泡)；

e.  将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时；

f.  用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

注：加入 CCK-8 试剂后震荡混匀。

4.  计算公式

细胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%                  抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%

As:  实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK8 溶液和药物溶液)；

Ac:  对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK8 溶液，不含药物)；

Ab:  空白孔吸光度 (含培养基、CCK8 溶液，不含细胞、药物)。

注：如果待测药物有氧化性或还原性，可在加入本品之前更换新鲜培养基，去掉待测药物的影响。当 待测药物影响比较小的情况下可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。

注意事项

1.   第一次做实验时，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入本品后的培养时间。

2.   有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加本品时，建议 斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰 O.D 值读数。

3.   如果培养基里有氧化还原性物质，可能会产生误差，必须更换其它培养基。

4.   O.D.值在 0. 1-2.0 范围内均属正常，在 1.0 附近误差最小。

5.   本品不适用于植物细胞，酵母细胞及各类组织的检测。

保存条件

避光保存；4 ℃ ，可保存 1 年；-20 ℃ ，可保存 2 年。切勿反复冻融。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

暂时没有相关论文及文献，热烈欢迎各位同学大佬前来投稿，提交论文申请论文奖励。

                                                                              奖励详情：请联系区域销售经理