Beijing CHEJETER Technology Co.,Ltd.

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细胞核提取试剂盒说明书

产品信息

产品简介

细胞核提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的细胞核。适 合于动物软组织 (肝或脑组织) 和硬组织 (肌肉) 以及培养细胞的细胞核的制备。 其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。 产品不含污染性蛋白酶和核酶，性能稳定。

产品内容

使用方法

1.  样本处理

a.  组织匀浆：称取 100~200 mg  新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS  或生理盐 水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加 入 1.0 mL  预冷的 Lysis Buffer ，再加入 50μL Reagent A ，0℃冰浴中上下研磨 组织 20  次；有未研磨开的组织，可用双层纱布过滤。

b.  培养细胞匀浆：消化细胞，PBS  洗涤，800 g  离心 5~ 10 min  收集细胞，计 数。每次提取需要 5 ×107  个细胞，加入 1.0 mL  冰预冷的 Lysis Buffer  重悬细 胞，再加入 50μL Reagent A，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴 研磨细胞 20~30  次。

2.  将组织或细胞匀浆物转移到 1.5mL  离心管中，4℃ ，700g  离心 5 min 。细 胞核沉淀在收集管底部，弃上清。加入 0.5 mL  冰预冷的 Lysis Buffer  重悬沉淀。

3.  取另一新离心管内加入 0.5 mL Medium Buffer ，吸取上一步的重悬液，沿管 壁小心地加入到此离心管中，置于 Medium Buffer  之上，4℃，700 g  离心 5min。 细胞核沉淀在管底。

4.  弃上清，在细胞核沉淀中加入 0.5 mL Lysis Buffer  重悬细胞核沉淀，1000g 离心 10min  ，弃上清，得到较纯的细胞核沉淀。

5.  用 50- 100μL Store Buffer  或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀，立即使用或 -70℃保存。

注意事项

1.  为保证获得完整的细胞核，务必做到：第一，全程低温操作；第二，快速； 第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞，这是制备细胞核的最关键环节。与 组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因 而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。

2.  以离心力 g  计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。

3.  进行 Western Blot  和 2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解细胞核。

转速与离心力换算:G＝1. 11×( 10-5) ×R×[rpm]2

G  为离心力，一般以g (重力加速度) 的倍数来表示；

[rpm]2 即：转速的平方；  R  为半径，单位为厘米。

保存条件

短期使用可 4℃储存，长期保存请置于-20℃或-70℃。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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