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细菌蛋白制备裂解液 (含 Tris-HCl)

产品简介

考马斯亮兰 G-250  染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收 峰的位置 (max ) ， 由 465nm  变为 595nm ，在一定的浓度范围内，测定的吸光 度值 A595  与蛋白质浓度成正比。Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中 的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达 1M，二硫苏糖醇的浓度可高 达 5mM ，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保 SDS  的浓度低于 0. 1% ，Triton X- 100 低于 0. 1% ，Tween 20, 60, 80  低于 0.06%。

产品内容

使用方法

一．微孔酶标仪法

1.  完全溶解蛋白标准品，取 10μL ，稀释至 250μL  ，使终浓度为 0.2mg/mL 。 待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见， 也可以用 0.9%NaCl  或 PBS  稀释标准品。

2. 5×G250  染色液使用前请颠倒 3-5  次混匀，取 1mL 5×G250  染色液，加入 4mL  双蒸水，混匀成 1×G250  染色液，此 1×G250  染色液可在 4℃保存一周。

3.  将标准品按 0 、2 、4 、6 、8 、12 、16 、20  微升分别加到 96  孔板中，加 PBS 稀释液补足到 20  微升。

4.  将样品作适当稀释 (最好多做几个梯度，如作 2  倍、4  倍、8  倍稀释)，加 20 微升到 96  孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可 能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2  后。

5.  各孔加入 200  微升稀释后的 1×G250  染色液，室温放置 3-5  分钟。

6.  用酶标仪测定 A595 ，或 560-610nm  之间的其它波长的吸光度。

7.  根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

二．分光光度计法

如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分 光光度计测定吸光值。

步骤如下：

1.  取八支 (或者更多) 干净的 10mL  离心管，标记上号。

2.  取 100μLBSA  加入 PBS 2.4mL  稀释至终浓度为 0.2mg/mL。

3. 5×G250  染色液使用前请颠倒 3-5  次混匀，取 10mL 5×G250  染色液，加入 40mL  双蒸水，混匀成 1×G250  染色液，此 1×G250  染色液可在 4℃保存一周。

4.  按下表加入试剂(以每孔 5mL  计，多余的用来清洗比色皿)

5.  反应 3 分钟后测 OD  值。为了实验的准确性，可每间隔 2  分钟加一管染色液，每间隔 2 分钟测一管 OD 值。如下表：

此图为伯乐酶标仪 680 ，单波长，570nm  测得。室温反应三分钟。

保存条件

2-8℃保存，有效期 12 月。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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