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Western 及 IP 细胞裂解液

产品信息

产品简介

Western 及 IP 细胞裂解液内含非离子型去垢剂， 能裂解细胞并在非变性条件下释 放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地 保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合或酶学活性，因此适宜于进行免疫 共沉淀。另外， 有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋 白的抗原位点，这种情况应该使用非变性裂解。

使用方法

根据使用量，取每 1 mL 裂解液加入 10 μL PMSF ，使 PMSF  的最终浓度为 1 mM 。混匀 备用(PMSF 现用现加)。

1 、样品前处理：

a)对于贴壁细胞： 去除培养液， 用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6  孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解 液和细胞充分接触，冰上放置裂解 5- 10  分钟。

b)对于悬浮细胞： 离心收集细胞， 用手指把细胞用力弹散。按照 6  孔板每孔细胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液， 冰上放置裂解 5- 10  分钟。期间可 以用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量 较多，必需分装成 50- 100  万细胞/管，然后再裂解。

c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每 20  毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液， 如果需要高浓度的蛋白样品， 可以适当减少裂解液的用量) 。 用玻璃匀浆器匀浆， 直至充分裂解。

2 、后处理：充分裂解后，将裂解后的样品 10000- 14000 g  离心 3-5  分钟，取上清，即可进 行后续的 PAGE 、Western  和免疫沉淀、免疫共沉淀等操作。

注意事项

为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。裂解时间可根据实验要求进行优化 处理。

Western 及 IP 细胞裂解液裂解得到的蛋白样品， 可以用 BCA  蛋白浓度测定 试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的 Triton X- 100  等干扰物质，不能用 Bradford  法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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