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NP-40 裂解液说明书

产品信息

产品简介

NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE 、Western 、免疫沉淀(immunol precipitation ，IP) 、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。

本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。

NP-40 裂解液的主要成分为 50mM Tris(pH7.4) ， 150mM NaCl ， 1% NP-40 以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA ，leupeptin 等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

由于含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用方法

1.  对于培养细胞样品：

a.  融解 NP-40  裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF ，使 PMSF  的最终浓度为 1mM ，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

b.  对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS 、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗) 。按照 6  孔板每孔加入 150-250  微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞 1-2  秒后，细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解 2- 10min。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，轻轻 vortex 或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50- 100 万细胞/管，然后再裂解。

对于细菌或酵母：对于 1ml 菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用PBS 洗涤一次，充分去除液体后，轻轻 vortex 或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入 100-200 微升裂解液，轻轻 vortex 或者弹击管底以混匀，冰上裂解 2- 10min。如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液进行裂解。

裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞或者 1ml 的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入 150 微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。每 100 万动物细胞用 100 微升本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为 2-4mg/ml ，不同细胞有所不同。

c.  充分裂解后，10000- 14000g  离心 3-5  分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western  和免疫沉淀等操作。

2.  对于组织样品：

a.  把组织剪切成细小的碎片。

b.  融解 NP-40  裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF  的最终浓度为 1mM ，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

c.  按照每 20  毫克组织加入 150-250  微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

d.  用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。

e.  充分裂解后，10000- 14000g  离心 3-5  分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western  和免疫沉淀等操作。每 20mg  冻存的小鼠肝脏组织用 200  微升本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为 15-25mg/ml ，不同状态的不同组织有所不同。

f.  如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex  使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。

注意事项

1.为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4ºC 进行。

3.关于裂解液的选择，需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

保存条件

-20℃保存，有效期1年。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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