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AR RAPI 裂解液（弱）说明书

AR RIPA Lysis Buffer（low）  Instruction

产品信息

产品介绍

AR 的 RIPA 裂解液（弱）(RIPA Lysis Buffer-low)是一种温和的细胞组织裂解液。RIPA 裂解液含有多种蛋白酶抑制剂，可有效减少蛋白降解，裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE 、Western 、免疫沉淀

(immunol precipitation ，IP) 、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。AR 的裂解液可根据其裂解强度不同，分为强、中、弱三类。

产品特色

裂解高效

经短时间作用即可完全裂解；

轻松便捷

本产品内包含多种蛋白酶抑制剂，可以有效抑制蛋白降解；

应用广泛

可裂解动物、植物的细胞或组织样品，也可用于真菌或细菌样品等。

操作步骤

融解 RIPA 裂解液，取适量裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF ，使终浓度为 1mM ，或根据实验需要加入适当蛋白酶抑制剂复合物或/和磷酸酶抑制剂混合物。

1.细胞样品

贴壁细胞

1.     弃掉培养液，用 PBS 或生理盐水漂洗细胞一遍。

2.     按照 6  孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液，具体体积参照细胞密度决定。

3.     吸取裂解液用移液枪吹打贴壁细胞，使裂解液和细胞充分接触，本步操作宜在冰板下进行。

通常情况下，动物细胞接触裂解液 1-2 秒后会被裂解。

悬浮细胞

1.     离心 1200rpm ，5min 后收集细胞，轻轻弹击管底把细胞尽量分散开。

2.     按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液，轻弹管底以充分裂解细胞，裂解至没有明显的细胞沉淀，此时细胞裂解完全。如果细胞量多，必需分装成 50- 100 万细胞/管，然后再裂解。

细菌或酵母

1.     取 1ml 菌液或酵母液，离心去上清。

2.     充分去除液体后，加入 100-200 微升裂解液，轻弹管底以充分裂解细胞，于冰上裂解 2- 10min至裂解完全。

2.组织样品

1.     组织剪切成细小的碎片。

2.     按照每 20  毫克组织加入 150-250  微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

3.     用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解，也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。

3.蛋白样品收集

充分裂解后，10000- 14000g 离心 3-5  分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE 、Western 、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项

1.     用户可根据不同细胞蛋白的溶解程度自行选择强、中、弱三种裂解液。

2.     对于某些难溶解蛋白的 Western及特殊蛋白的 IP ，如果发现 AR RIPA 裂解液（弱）效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液，例如 AR RIPA 裂解液(强) AP0231 、AR RIPA 裂解液 (中) AP0241。

3.     本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒，请选择 BCA 法或者 Lowry 法检测蛋白浓度。

4.     为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

5.     裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

6.     RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验。

保存条件

-20℃保存，有效期 1 年。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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