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AR RIPA 裂解液（强）说明书

AR RIPA Lysis Buffer（high） Instruction

产品信息

产品介绍

AR 的 RIPA 裂解液（强）(RIPA Lysis Buffer-high)是一种高效的细胞/组织裂解液。RIPA裂解液含有多种蛋白酶抑制剂，可有效减少蛋白降解，裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western 、免疫沉淀(immunol precipitation，IP) 、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。AR 的裂解液可根据其裂解强度不同，分为强、中、弱三类。

产品特色

裂解高效

经短时间作用即可完全裂解；

轻松便捷 

本产品内包含多种蛋白酶抑制剂，可以有效抑制蛋白降解；

应用广泛

可裂解动物、植物的细胞或组织样品，也可用于真菌或细菌样品等。

操作步骤

融解 RIPA 裂解液，取适量裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF ，使终浓度为 1mM ，或根据实验需要加入适当蛋白酶抑制剂复合物或/和磷酸酶抑制剂混合物。

1.细胞样品

贴壁细胞

1.     弃掉培养液，用 PBS 或生理盐水漂洗细胞一遍。

2.     按照 6  孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液，具体体积参照细胞密度决定。

3.     吸取裂解液用移液枪吹打贴壁细胞，使裂解液和细胞充分接触，本步操作宜在冰板下进行。

通常情况下，动物细胞接触裂解液 1-2 秒后会被裂解。

悬浮细胞

1.     离心 1200rpm ，5min 后收集细胞，轻轻弹击管底把细胞尽量分散开。

2.     按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液，轻弹管底以充分裂解细胞，裂解至没有明显的细胞沉淀，此时细胞裂解完全。如果细胞量多，必需分装成 50- 100 万细胞  /管，然后再裂解。

细菌或酵母

1.     取 1ml 菌液或酵母液，离心去上清。

2.     充分去除液体后，加入 100-200 微升裂解液，轻弹管底以充分裂解细胞，于冰上裂解 2- 10min至裂解完全。

2.组织样品

1.     组织剪切成细小的碎片。

2.     按照每 20  毫克组织加入 150-250  微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

3.     用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解，也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液

进行裂解。"

3.蛋白样品收集

充分裂解后，10000- 14000g 离心 3-5  分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE 、Western 、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项

1.     用户可根据不同细胞蛋白的溶解程度自行选择强、中、弱三种裂解液。

2.     对于某些难溶解蛋白的 Western及特殊蛋白的 IP ，推荐使用裂解强度高的裂解液效果比较理想。

3.     本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒，请选择 BCA 法或者 Lowry 法检测蛋白浓度。

4.     为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

5.     裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

6.     RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验。

保存条件

-20℃保存，有效期 1 年。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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