半纤维素含量试剂盒说明书
（货号：GF95261 微板法 48样/96样）
一、 产品简介：
半纤维素是植物细胞壁中与纤维素紧密结合的多糖混合物，是构成细胞初生壁的主要成分，广泛存在于植物中，是一种新型可利用能源。
本试剂盒在美国NREL实验室的方法基础上略做改进以检测半纤维素含量，在酸性条件下加热使半纤维素水解生成木糖。通过比色法检测生成的木糖含量，进而计算得出半纤维素含量。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体10mL×1瓶 | 4℃保存 | 临用前再缓慢加入20mL浓硫酸，混匀备用。 |
试剂一 | 粉体mg×2瓶 | 4℃保存 | 临用前甩几下使粉剂落入底部，每瓶加入17.5mL冰乙酸溶解，再缓慢加入1.05mL浓盐酸混匀；用不完的试剂避光4℃保存一个星期。 |
标准品 | 液体×1支 | 4℃保存 | 该标准品浓度为0.5mg/mL。 |
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96孔板、烘箱/水浴锅、可调式移液器、冰乙酸、浓硫酸、浓盐酸、蒸馏水。
四、半纤维素含量：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、样本制备：取烘干的样本做剪碎处理（剪成1mm大小），称取0.02g(即20mg)剪碎样本至10mL离心管或玻璃试管中，再加入0.2mL提取液（注：液体和样本需混匀，并密封管口），30℃水浴1小时，再加入5.6mL蒸馏水混匀，密封管口；然后放入110℃烘箱1小时，取出冷却，混匀后可取1mL混合液至2mLEP管中，于8000rpm，室温离心5min，取上清液待测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热30min，设置温度在25℃，设定波长到460nm。
② 可取两个样本做适当梯度的稀释（如3倍，即1份上清液+2份蒸馏水），确定适合本次实验的稀释倍数D。
③ 在EP管中依次加入：
试剂（μL） | 测定管 | 标准管 （仅做一次） | 空白管 （仅做一次） |
样本 | 60 | ||
标准品 | 60 | ||
蒸馏水 | 60 | ||
试剂一 | 300 | 300 | 300 |
混匀，沸水浴（95℃）水浴8min（精确时间；防止水份散失，可用封口膜缠紧），冷却后取200μL至96孔板中，于460nm处读取吸光值A，△A=A测定管-A空白管。 | |||
【注】若A测定值大于1，可用蒸馏水进一步稀释样本（即上清液），稀释倍数D需
代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本干重计算：
半纤维素（mg/g干重）=(C标准×V1)×ΔA÷(A标准-A空白)÷（W×V1÷V）×D
=2.9×ΔA÷(A标准-A空白)÷W×D
半纤维素含量（%）={(C标准×V1)×ΔA÷(A标准-A空白)÷（W×V1÷V）×D×10-3×100}%
=[0.29×ΔA÷(A标准-A空白)÷W×D] %
C标---0.5mg/mL； V---加入提取液体积，5.8mL；
V1---加入样本体积，0.06mL； W---样本鲜重，g；
D---稀释倍数。
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
本说明书由专业ELISA试剂盒生产商雪杰特为您提供。
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