相关信息
别名人外周血淋巴细胞分离液 人淋巴 ficoll分离液
储存条件RT，避光，有效期2年
规格200ml
密度：1.077g/cm3
Ficoll Plus 1.077是一种无菌的，用于提纯少量或大量人外周血中高产和高纯度的淋巴细胞的即用型密度梯度介质。基于Boyum发展方法中的一简单快速的离心操作来完成纯化过程。Ficoll Plus 1.077也可以用来制备除人外周血其他来源的淋巴细胞。
Ficoll分层液法原理简介
主要用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次密度梯度离心分离法。聚蔗糖－泛影葡胺是一种较理想的细胞分层液，其主要成分是一种合成的蔗糖聚合物称聚蔗糖（商品名为Ficoll），分子量为40kD，具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。高浓度的Ficoll溶液粘性高，易使细胞聚集，故通常使用60g/L的低浓度溶液，密度为1.020，添加比重为1.200的泛影葡胺（urografin）以增加密度。国外常用商品Isopaque或Hypaque，故又称Ficoll-Hypaque分层液，将适量340g/L泛影葡胺加入Ficoll溶液中即可配制成密度合适分层液。分离人外周淋巴细胞以密度为1.077±0.001的分层液最佳，因为人的红细胞密度为1.093，粒细胞密度为1.092，单个核细胞在1.076～1.090之间。而不同动物血中的单个核细胞对分离液的密度要求各不相同，如小鼠为1.088，马为1.090。分离时先将分层液置试管底层，然后将肝素化全血以Hanks液或PBS液作适当稀释后，轻轻叠加在分层液上面，使两者形成一个清晰的界面。水平式离心后，离心管中会出现几个不同层次的液体和细胞带（图20-1）。红细胞和粒细胞密度大于分层液，同时因红细胞遇到Ficoll而凝集成串钱状而沉积于管底。血小板则因密度小而悬浮于血浆中，唯有与分层液密度相当的单个核细胞密集在血浆层和分层液的界面中，呈白膜状，吸取该层细胞递经洗涤高心重悬。本法分离单个核细胞纯度可达95％，淋巴细胞约占90％～95％，细胞获得率可达80％以上，其高低与室温有关，超过25℃时会影响细胞获得率。
注意事项：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴好一次性手套和口罩。
Ficoll Plus 1.077
货号：Q5350
产品简介:
本产品是一种无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据血细胞的密度差异，通过离心使细 胞按相应密度梯度分布，从而将细胞从血液中分离出来。
产品指标：
密度 1.077 ± 0.001g/mL
渗透压 290~350 mOsm/kg H2O
无菌 0.1μm 滤膜过滤
保存条件：
本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期 2 年。无菌开封后，保存于室温。
操作步骤：
1. 取新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可）或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液 或者PBS稀释全血。
2. 在离心管中加入适量分离液（当稀释后血液体积小于3mL时，加入3mL分离液；大于等于3mL，加入等体积 分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将稀释后的血液平铺到分离 液液面上方，注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液 上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。如果样品较多加样时间较长，在离心之前出现红细胞成 团下沉属正常现象。）
3. 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min （血液的体积越大所需的离心力越大，离心 时间越长，最佳的分离条件需摸索，离心转 速最大不超过1200g）。
4. 离心后将出现明显的分层：最上层是稀释的 血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分 离液之间的白膜层即为细胞层，离心管底部 是红细胞与粒细胞。
5. 小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心 管中， 10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层 细胞。250g，离心10min。
6. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。
7. 重复步骤6
8. 弃上清，细胞重悬备用
注意事项：
A. 开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。
B. 分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条 件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
C. 血液样本最好为新鲜抗凝血（采血2 h以内），为保持细胞的活性，应避免冷冻和冷藏。
D. 稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降低细胞 得率及纯度。
E. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。
F. 血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸索最佳的分离 条件。
G. 吸取过多的细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加；吸取过多 的血浆层可能会导致细胞中血浆蛋白及血小板污染。
H. 如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生物污染。
I. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液 的比重、动物种属及被分离细胞的名称。
实验操作注意事项：
1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。
2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴好一次性手套和口罩。
说明书由专业生化试剂供应商雪杰特为您提供。
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