产品描述
GelRed是灵敏、稳定、对环境安全的荧光核酸染料、用来替代剧毒性的溴化乙锭(EB),用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA,SsDNA或RNA的染色。事实上GelRed和EB拥有相同的光谱(图1),所以可以用GelRed直接替代EB而不用更换现有的成像系统。另外，GelRed的灵敏度远高于EB(图2)。
GelRed™经过一系列的测试，并且经过3个独立的测试服务公司评估日常处理处置时染料的安全性。测试结果表明，染料对于手套和细胞膜都是不能穿透的。在浓度远高于凝胶染色工作浓度的情况下，染料是无细胞毒性和非诱变性的。GelRed™成功通过了按照CCR标明的22项危险废物特征的环境安全测试，这项条例没有将GeRed“分类为危险废物。
尽管GelRed™经过了大量的安全性测试，但是建议在实验室工作时遵循通用的安全措施。
Beijing CHEJETER Technology Co.,Ltd.
Tel:010-82700004
Wed:www.cjt-bio.com
E-mail:finance@cjt-bio.com
GelRed™ 核酸凝胶染料，10,000X
说明书
产品信息
| 产品名称 | 产品货号 | 规格 | ||
GelRed™ 核酸凝胶染料，10,000X | XJ41005 | 0.5mL | ||
XJ41005:溶于水
贮存和运输
GelRed是非常稳定的染料。GelRed的10,000X溶液和稀释液室温下避光储存，低温下染料可能出现沉淀，导致信号偏低或者在凝胶表面有沉淀出现。如果出现这种情况，格溶液加热到45-50℃,保持2min并涡旋。到货后GelRed™ 能保持稳定至少一年以上。
产品描述
GelRed是灵敏、稳定、对环境安全的荧光核酸染料、用来替代剧毒性的溴化乙锭(EB),用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA,SsDNA或RNA的染色。事实上GelRed和EB拥有相同的光谱(图1),所以可以用GelRed直接替代EB而不用更换现有的成像系统。另外，GelRed的灵敏度远高于EB(图2)。
GelRed™经过一系列的测试，并且经过3个独立的测试服务公司评估日常处理处置时染料的安全性。测试结果表明，染料对于手套和细胞膜都是不能穿透的。在浓度远高于凝胶染色工作浓度的情况下，染料是无细胞毒性和非诱变性的。GelRed™成功通过了按照CCR标明的22项危险废物特征的环境安全测试，这项条例没有将GeRed“分类为危险废物。
尽管GelRed™经过了大量的安全性测试，但是建议在实验室工作时遵循通用的安全措施。
光谱特性
图1.GelRed™在TBE缓冲液中结合dsDNA后的激发（左）和发射 (右）光谱
GelRed™Nucleic Acid Gel Stain
图2比较EB和GelRed™在1%预制凝胶(TBE缓冲液)中的染色效果。使用Invitrogen公司的1 kb Plus DNA Ladder样品2倍梯度稀释上样，各泳道上样量从左到右依次为200 ng,100 ng,50 ng和25 ng。使用300nm激发的凝胶成像系统和EB滤光片成像，并使用Polaroid 667黑白打印。
染色步骤
由于高亲和力的核酸结合染料会影响DNA在电泳时的迁移，因此椎荐凝胶后泡染法。GelRed泡染法显示出优越的灵敏度，并且消除了染料影响DNA迁移的可能性。GelRed™可以预制到琼脂糖凝胶中使用胶染法，但是GelRed™可能会影响到预制胶中一些DNA样品的迁移率和分辨率。在聚丙烯酰胺凝胶中不推荐使用胶染法。
GelRed可以用来染色dsDNA,ssDNA或者RNA,但是GelRed染色dsDNA时的灵敏度是ssDNA或RNA的两倍。GelRed™染色凝胶适用于下游的应用，如测序和克隆。通过苯酚/氧仿抽提和醇沉淀能够有效地将DNA中的GelRed移除。
1.泡染法
1.1按照常规方法进行凝胶电泳。
1.2稀SelRed用水将10,000X储液稀释3300倍制成3X染色液。通常情况下50ml染色液足够染色一块小凝胶。
注：染色液中含有0.1M NaCl能增强灵敏度，但可能会促使凝胶染色出现沉淀。
1.3把凝胶放于合适的容器，如聚丙烯染色拖盘中。添加足量的3X染色液浸没凝胶。
1.4室温缓慢振荡染色30min。注：最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同略有不同。对于含3.5-10%丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min至1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。
1.5不必脱色，必要的话可以水洗以降低背景值。
1.6观察染色凝胶使用标准的透照仪(302或312nm),成像使用溴化乙锭滤波片，SYBR或GelStar滤光器凝胶成像也可以得到很好的结果。
17染色液可重复使用2-3次，室温下避光保存。
2.胶染法
2.1常规方法准备熔化的凝胶。胶染法不适用于聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
2.2稀释GelRed10,000×以1：10,000比例加入到熔化的凝胶中，完全混匀。GelRed可在凝胶还温热时直接添加。
2.3倒胶，室温下凝固。
2.4按常规方法上样电泳。注：预制胶中橙色的G示踪染料和GelRed™是不兼容的。
2.5观察染色凝胶使用标准的遗照仪(302或312 nm),成像使用澳化乙锭滤光器，SYBR或GelStar滤光器凝胶成像也可以得到很好的结果。
2.6未使用的含有GeIRed™的预制凝胶可以重新熔化做胶，为保证最佳荧光信号，酌情适量添加染料。不推荐长期储存含有GelRed™熔化形式的琼脂糖。含有GelRed™的预制胶可以保存在4℃,供下次使用。
常见问题
1.胶染法中DNA条带模糊不清，出现“笑脸Smear”条带
建议：
1)减少DNA上样量至1/2或1/3。GelRed比EB更加灵敏。电泳过载会导致曝光过度或者条带模糊，通常会在DNA Ladders中出现这种情况。
2)加载包括SDS的上样缓冲液可能会导致Smear。如果发生这种情况，请使用泡染法，用于需要包括DSD的Loading buffer。
3)大片段分子使用低浓度的琼脂糖凝胶获得更好分辨率，
4)更换电泳缓冲液。TBE缓冲液比TAE具有更强的缓冲能力。
5)使用泡染法代替胶染法。
2.胶染法中DNA迁移有差异
GelRed比其他染料分子量大，以防止染料进入细胞，因而更安全，染料和DNA的比率可能影响DNA的迁移。
建议：
1)减少DNA上样量至1/2或1/3。
2)减少GelRed在凝胶中的总量，比如用0.5X的浓度来代替1X的浓度。
3)为了避免电泳时染料可能对DNA迁移的干扰，建议使用电泳后泡染法。
3.荧光弱，时间久燃料性能降低，或使用泡染法染料在琼脂糖凝胶中有可见残留物
染料可能在溶液中发生沉淀。建议：
1)加热GelRed至45-50℃,2min,搅拌溶解。
2)染料在室温下储存，以避免沉淀。
问与答FAQ
GelRed可以用来染色单链DNA吗? | GelRed可用于单链DNA和RNA的染色，GelRed结合单链DNA和RNA荧光信号约是结合双链DNA的一半左右。 |
GelRed与克隆，连接和测序等下游应用兼容吗? | 可以。我们建议使用Qiagen公司或Zymoclean凝胶提取试剂盒，或酚-氯仿抽提法去除DNA中的染料成分。一些用户反映溶解的琼脂糖胶中已经染色GelRed的DNA也可直接用于PCR而不需要纯化步骤。 |
GelRed可以被用于基于甲醛的RNA凝胶吗?用于聚丙烯酰胺，DGGE技术，EMSA实验或PFGE(脉冲场)凝胶吗? | 可以。有报道科研工作者在糖醛和甲醛凝胶中使用GelRed对RNA进行染色是用的胶染法。用于聚丙烯酰胺、DGGE和EMSA凝胶使用的泡染法。对于PFGE凝胶(脉冲场电泳),可以使用胶染法或泡染法。 |
可以被用于COMET分析吗? | 可以。GelRed可以用于COMET分析，建议采用泡染法。 |
GelRed可被用于氯化铯梯度纯化的DNA染色吗? | 可以。氯仿去除氯化铯梯度纯化的DNA中的Gelred。客户报告使用了在铯梯度中使用的凝胶。我们建议在丁醇提取之前，将SDS的浓度提高到0.1%的浓度，以便将DNA中从凝胶中提出。或者用氯仿代替丁醇提取。 |
GelRed和Southern或northern blotting兼容吗? | GelRed™已经被证实兼容Southern(Plant Cell Report doi:10.1007/s00299-011-1150-7)。我们建议使用泡染法。 |
哪种loading buffer兼容GelRed? | 我们经常使用6X的loading buffer,其中含有15%的甘油，7.5%的Ficoll 400,0.05%的溴酚蓝，以及0.1%的Patent Blue VF。在内部测试中，6Xloading buffer含有0.1%的橙色G示踪，在胶染法和泡染 法中产生了良好的效果。加载包含SDS的上样缓冲液可能会导致smear。如果发生这种情况，请使用泡染法，用于需要包含SDS的loading buffer。 |
什么样的发射滤波片适合于GelRed? | 用EB滤波片照Gelred凝胶。SYBR或GelStar滤光器也可以用于凝胶成像，效果同样好。请留意一下针对特定波长的Gelred凝胶的发射光谱。 |
GelRed预制胶电泳后能重复使用吗? | 不可以，我们不建议GelRed凝胶电泳后重复使用，因为连续电泳会减少染色强度。 |
GelRed用后应该如何处置? | GelRed通过EPA环保监管局22个指标测试。GelRed已经被相关部门批准，可以直接倾倒入下水道。 然而，由于地方规定的差异，您可以请联系您当地的安全监管部门获取相关条例。GelRed作为化学废料可被活性炭吸附。 |
GelRed检测下限是什么? | 有些用户反馈可以检测含量<0.1ng的dna。然而，染色的灵敏度也取决于仪器的性能和曝光设置等。 |
GelRed的结合DNA机制是什么? | GelRed作用原理是通过嵌入式的排他性的共价键方式结合。(http://link.springer.com/ article/10.1007/s00249-014-0995-4) |
GelRed迁移的方向? | GelRed相比于EB来说，不容易通过凝胶迁移。不需要在电泳缓冲液中添加额外的染料，凝胶也会比EB染色更均匀。 |
GelRed需要在黑暗中使用吗? | GelRed非常稳定。你可以在室内光线下使用。长期保存，我们还是建议将染料存储于避光环境。 |
不小心把GelRed留在光照下，还能继续使用吗? | 我们建议您将染料避光长期保存，有用户反应将GelRed在自然光下放置一个月后仍能成功使用。 |
10,000XGelRed溶于DMSO和水有什么区别? | GelRed水溶液和DMSO溶液相比是一个新的改良。我们建议使用GelRed水溶液，避免接触DMSO的潜在危害。DMSO可通过皮肤吸收到体内。我们继续提供GelRed的DMSO溶液，因为部分用户不愿意改变他们原有制定的实验室方法。 |
1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
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