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高效 RIPA 裂解液 （组织/细胞）

使用说明书

货号 ：S1010

规格 ：100 mL

保存 ：有效期 1 年。  附件：PMSF（Q1100）

产品组成:

        RIPA 裂解液:100mL（2-8℃）存储

        PMSF:1.5mL（-20℃）存储

使用说明（仅供参考） ：

如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量，取每1mLRIPA加入10μLPMSF ，使PMSF的最终浓度为1mM 。混匀备用（PMSF现用现加）。样本裂解均需要冰上或低温操作，裂解时间20-30 分钟。

1 、样品前处理：

a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250μL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2 、后处理：

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE 、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

注意事项 ：

1、本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠：此时可以超声打断基因组或者直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可加入少量SDS（1%），煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。

2、如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物， 随后离心取上清用于后续实验。

注意事项：

1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴好一次性手套和口罩。