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中性磷酸酶免疫分析试剂盒

使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：

1IU/L - 50IU/L

使用目的：

本试剂盒用于测定土壤样本中中性磷酸酶活性。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中中性磷酸酶水平。用纯化的中性磷酸酶抗体包 被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入中性磷酸酶，再与 HRP 标记的中 性磷酸酶抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和 样品中的中性磷酸酶呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准 曲线计算样品中中性磷酸酶活性浓度。

试剂盒组成

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品 10μl  (样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底 部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀， 37℃避光显色10分钟.

10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定：以空白孔调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定， 计算时请最后乘以总稀释倍数( ×n×5)。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：； 2-8℃。

2．有效期： 6 个月

免责声明

1.   试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

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