产品介绍
测定意义：
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。
测定原理：
ATP 在 254 nm 下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。
保存条件
2-8℃保存
Beijing CHEJETER Technology Co.,Ltd.
Tel:010-82700004
Wed:www.cjt-bio.com
E-mail:finance@cjt-bio.com
ATP含量检测试剂盒
HPLC法
产品信息
| 产品名称 | 产品货号 | 规格 | |||
| ATP含量检测试剂盒 | SH22310 | 50 管/48 样 | |||
| SH22310 | 100 管/96 样 | ||||
产品简介
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是 描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能 量代谢状态。
ATP 在 254 nm 下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。
产品内容
组成 | 含量 | 保存 |
试剂一 | 60mLx1 瓶 | 4℃ |
试剂二 | 60mLx1 瓶 | 4℃ |
试剂三 |
粉剂 1x1 瓶， 粉剂 2x1 瓶， | 4℃； 临用前用少量蒸馏水将粉剂 1 和粉剂 2 溶解后倒入 1000mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至 1000mL ，形成流动相缓冲液基质 (注：试剂瓶中的粉剂要冲洗干净) , 4℃可保存 1 周； |
试剂四 | ATP 标准品 5mg×1 支， | -20℃ |
使用方法
需自备的仪器和用品：高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤 器 (水系，50 个，0.22μm)、滤膜 (水系和有机系各 1 个，0.45μm) 、C18 柱 (4.6 ×150 mm)、可调式移液器、样品瓶 (50 个，2mL)、甲醇 (色谱级，300 mL) 和蒸馏水。
实验前的准备工作：
1、将蒸馏水 1000 mL、流动相缓冲液基质 1000 mL 和甲醇 300 mL 用 0.45 μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。(注：蒸馏水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤， 甲醇用有机系滤膜抽滤)。
2 、流动相的配制：将抽滤完毕的流动相缓冲液基质 1000 mL 与甲醇配比为 99.9 ：0. 1 (v/v )，即取 999mL 缓冲液基质与 1mL 甲醇混合。
3、将抽滤完毕的甲醇和蒸馏水配比成 100%的甲醇，10%的甲醇，蒸馏水各 250 mL 。将 2 和 3 中的溶剂超声 20 分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱 柱。
ATP 的提取：
1 、组织的处理：按照组织质量 (g)：试剂一体积(mL)为 1 ：5~ 10 的比例 (建 议称取约 0. 1g 组织，加入 1mL 试剂一)，进行冰浴匀浆，4000g 常温离心 15 min ，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000 g 常温离心 15 min ，取上 清，针头式过滤器过滤后待测。
2 、细胞或细菌的处理：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细 菌或细胞数量 (104 个)：试剂一体积 (mL) 为 500~ 1000：1 的比例 (建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一)，超声波破碎细菌或细胞 (冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s ，间隔 10s，重复 30 次)；4000 g 常温离心 15 min，取上清液， 加入等体积的试剂二，混匀，4000 g 常温离心 15 min ，取上清，针头式过滤器 过滤后待测。
标准品的配制：
在试剂四中加入 1mL 蒸馏水，配成 5mg/mL 母液，将母液用蒸馏水分别稀释 成 100 μg/mL 、80μg/mL 、6 0μg /mL 、40 μg /mL 和 20 μg /mL 的 ATP 标准品 溶液。针头式过滤器过滤后待测。
ATP 含量测定操作步骤：
1. 开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开软件，在方法组中设置进样量 20 μL ，流速 1 mL/min ，保留时间 10min ，检测波长 254nm ，设置完毕保存方 法组。
2. 用 100%的甲醇、10%的甲醇、蒸馏水按甲醇浓度从大到小的顺序过色谱柱 30min。
3. 用流动相过柱子，待基线稳定后开始加样。
4. 加入标准品 20 μL，在 10min 内可分离 ATP ， ATP 的保留时间在 3min 左右，(柱子不同，保留时间有差异)，计算不同浓度的 ATP 标准品的峰面积。
5. 加入样品 20 μL ，在相应保留时间处检测 ATP 的峰面积。
ATP 含量的计算：
以标准品浓度 (μg/mL) 为横坐标，峰面积为纵坐标计算 ATP 标准曲线。将样 品峰面积代入标准曲线，计算样品 ATP 含量。
注意事项
1 、为了避免使用过程中柱压过大，流速由小到大调节。
2 、使用完毕时，由于流动相含有缓冲盐，用水冲洗柱子 1 小时，以防止缓冲盐 结晶堵塞色谱柱，然后用 10%的甲醇、100%的甲醇按甲醇浓度从小到大的顺序 洗色谱柱 30min。
3、标准品的稀释倍数要根据样品中 ATP 浓度确定，样品中 ATP 的峰面积必须 落在不同浓度的 ATP 标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。
保存条件
2-8℃保存
1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
暂时没有相关论文及文献，热烈欢迎各位同学大佬前来投稿，提交论文申请论文奖励。
奖励详情：请联系区域销售经理
自主品牌
