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超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书

微量法

产品信息

产品简介

测定意义：

SOD  (EC 1. 15. 1. 1) 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化 物阴离子发生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD  不仅是超氧化物阴离子清除酶， 也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。

测定原理：

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.) ，O2-.可还原氮蓝四唑 生成蓝色甲臜，后者在 560nm  处有吸收；SOD  可清除 O2-. ，从而抑制了甲臜的 形成；反应液蓝色越深，说明 SOD  活性愈低，反之活性越高。

产品内容

使用方法

正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量 石英比色皿/96  孔板、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

1 、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或 细胞数量 (104 个)：提取液体积 (mL) 为 500~ 1000：1  的比例 (建议 500  万 细菌或细胞加入 1mL  提取液) ，超声波破碎细菌或细胞 (冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30  次)；8000g 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~ 10  的比例(建议称取约 0. 1g 组织，加入 1mL  提取液)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min ，取上清，置 冰上待测。

2 、血清 (浆) 样品：直接检测。

测定步骤：

1 、  分光光度计或酶标仪预热 30min  以上，调节波长至 560nm ，蒸馏水调零。

2 、 测定前将试剂一、二和四 37℃ (哺乳动物) 25℃ (其他物种) 水浴 5min  以 上。

3 、  样本测定 (在 EP  管中依次加入下列试剂)：

充分混匀，室温静置 30min  后，560nm  处测定各管吸光值 A。

注意事项

1 、试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。

2 、对照管只需要做一管。

SOD  活性计算：

1 、抑制百分率的计算

抑制百分率＝(A  对照管－A  测定管) ÷A 对照管× 100%

尽量使样本的抑制百分率在 30-70%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于 30%或大于 70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分 率偏高，则需将样本用提取液适当稀释；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需 重新准备浓度比较高的待测样本。

2 、SOD  酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为 50% 时，反应体系中的 SOD  酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)。

3 、SOD  酶活性计算：

(1)血清(浆) SOD  活性(U/mL)=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V  反总]÷V  样 ×样本稀释倍数=11.4×抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×样本稀释倍数

(2) 组织、细菌或培养细胞 SOD  活力计算：

a.按样本蛋白浓度计算

SOD  活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V  反总]÷(V  样×Cpr) ×样 本稀释倍数=11.4×抑制百分率÷( 1－抑制百分率)÷Cpr×样本稀释倍数

b.按样本鲜重计算

SOD  活性(U/g  鲜重)=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V  反总]÷(W×V  样÷V  样 总)×样本稀释倍数=11.4×抑制百分率÷( 1－抑制百分率)÷W×样本稀释倍数

c.按细菌或细胞个数计算

SOD 活力(U/ 104 cell)=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ×V 反总]÷(500×V 样÷V 样 总)×样本稀释倍数=0.0228×抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×样本稀释倍数

V  反总：反应体系总体积，1.026mL；V  样：加入反应体系中样本体积，0.09mL； V  样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL  ；W：样本 质量，g；500：细胞或细菌总数，500  万。

保存条件

2-8℃保存

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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