产品介绍
测定意义:
TG 是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不仅是细胞膜的主要成分,也是重要呼吸底物。
测定原理:
用异丙醇抽提取 TG,KOH 皂化 TG 后水解生成甘油及脂肪酸,过碘酸氧化甘油生成甲醛,在氯离子存在下甲醛与乙酷丙酮缩合生成黄色物质,在 420 mm 有特征吸收峰,其颜色的深浅与TG含量成正比。
保存条件
2-8℃保存
Beijing CHEJETER Technology Co.,Ltd.
Tel:010-82700004
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E-mail:finance@cjt-bio.com
甘油三酯(TG)含量检测试剂盒说明书
微量法
产品信息
产品名称 | 产品货号 | 规格 | ||
甘油三酯(TG)含量检测试剂盒 | SH29210 | 100 管/96 样 |
产品简介
TG 是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不仅是细胞膜的主要成分,也是重要 呼吸底物。
测定原理: 用异丙醇抽提取 TG, KOH 皂化 TG 后水解生成甘油及脂肪酸,过碘 酸氧化甘油生成甲醛,在氯离子存在下甲醛与乙酷丙酮缩合生成黄色物质,在 420 mm 有特征吸收峰,其颜色的深浅与 TG 含量成正比。
产品内容
组成 | 含量 | 保存 |
试剂一 | 液体x2 瓶 | 4℃ |
试剂二 | 液体 x1 瓶 | 4℃ |
试剂三 | 液体 x1 瓶 | 4℃ |
试剂四 | 液体 x1 瓶 | 4℃避光 |
试剂五 | 液体 x1 瓶 | 4℃避光 |
试剂六 | 液体 x1 瓶 | 4℃避光 |
标准品 | 液体 x1 支,1mg/mL 标准 甘油三酯溶液 | 4℃ |
使用方法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
需自备的仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、 可调式移液枪、双蒸水
TG 的提取:
1 、组织中 TG 的提取:按照组织质量 (g):试剂一体积(mL)为 1 :5~ 10 的比 例 (建议称取约 0. 1g 组织,加入 1mL 试剂一) 进行冰浴匀浆,8000g ,4℃离 心 10min ,取上清,即 TG 待测液。
2 、细胞、细菌中 TG 的提取:先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内,弃 上清,加 1mL 试剂一,超声波破碎 1min (强度 20%,超声 2s,停 1s),8000g, 4℃离心 10min ,取上清,即 TG 待测液。
3 、血清 (浆) 样品:直接测定。
测定操作:
1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30min ,调节波长到 420 nm ,蒸馏水调零。 2. 水浴锅预热到 65℃。
试剂名称μL | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
双蒸水 | 10 | ||
1mg/ml 标准液 | 10 | ||
TG 待测液 | 10 | ||
试剂一 | 125 | 125 | 125 |
试剂二 | 25 | 25 | 25 |
加试剂一后充分混匀,再加试剂二,剧烈振荡 30s,静置,待分层后取上层溶液 15μL ,置于新的 EP 管中。
3. 甘油三酯含量测定:
试剂名称μL | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
上层溶液 | 15 | 15 | 15 |
试剂三 | 50 | 50 | 50 |
试剂四 | 15 | 15 | 15 |
充分混匀,65℃水浴 3min | |||
试剂五 | 50 | 50 | 50 |
试剂六 | 50 | 50 | 50 |
充分混匀,65℃水浴 15min |
待冷却后,置于微量石英比色皿/96 孔板测定 420nm 处吸光值,记为 A 空, A 标和 A 测。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
计算公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1. 血清 (浆) 中甘油三酯含量计算:
TG 含量 (mg/dL) =C 标准品× (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ×100 mL = 100× (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空)
C 标准品:1mg/mL;100mL:血清体积,1dL= 100 mL。
2. 组织中甘油三酯含量计算:
( 1)按样本蛋白浓度计算
TG 含量 (mg/ mg prot) = C 标准品× (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷Cpr = (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷ Cpr
(2)按样本质量计算
TG 含量 (mg/ g) =C 标准品× (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷W = (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷ W
C 标准品:1mg/mL ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g/mL
3. 细胞、细菌中甘油三酯含量计算:
TG 含量 (mg/ 104cell) =C 标准品× (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷细菌或细胞 (104cell /L)
= (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷细菌或细胞 (104cell /L)
C 标准品:1mg/mL。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
1. 血清 (浆) 中甘油三酯含量计算:
TG 含量 (mg/dL) =C 标准品× (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ×100 mL
= 100× (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空)
C 标准品:1mg/mL;100mL:血清体积,1dL= 100 mL。
2. 组织中甘油三酯含量计算:
( 1)按样本蛋白浓度计算
TG 含量 (mg/ mg prot) = C 标准品× (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷Cpr
= (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷ Cpr
(2)按样本质量计算
TG 含量 (mg/ g) =C 标准品× (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷W
= (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷ W
C 标准品:1mg/mL ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g/mL
3. 细胞、细菌中甘油三酯含量计算:
TG 含量 (mg/ 104cell) =C 标准品× (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷细菌或细胞 (104cell /L)
= (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷细菌或细胞 (104cell /L)
C 标准品:1mg/mL。
注意事项
1.试剂盒中有易挥发性物质,实验过程中需佩戴手套和口罩,试剂瓶盖打开后应 该及时盖紧。
2.加试剂二后需剧烈震荡,使待测液中甘油三酯得到充分提取。
3 最低检出限为 100μmol/L。
保存条件
2-8℃保存
1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
3.实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。
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