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谷胱甘肽S-转移酶（GST）检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

产品信息

产品简介

测定意义：

GST  是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST  是体 内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与 GSH  的 巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将 体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此，GST  在保护细 胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因为 GST  具有 GSH-Px  活性，亦称为 non-Se GSH-Px ，具有修复氧化破坏的大分子如 DNA 、 蛋白质等的功能。注意，GST  催化的反应减少 GSH  含量，但是不增加 GSSG  含 量。

测定原理：

GST  催化 GSH  与 CDNB  结合，其结合产物的光吸收峰波长为 340nm；通过 测定 340nm  波长处吸光度上升速率，即可计算出 GST  活性。

产品内容

使用方法

正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 石英比色皿和蒸馏水。

粗酶液提取：

1.  组织：按照组织质量 (g)：试剂一体积(mL)为 1 ：5~ 10  的比例 (建议称取 约 0. 1g  组织，加入 1mL  试剂一) 进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min ，取 上清置冰上待测。

2.  细菌、真菌：按照细胞数量 (104 个)：试剂一体积 (mL) 为 500~ 1000：1  的 比例(建议 500  万细胞加入 1mL  试剂一)，冰浴超声波破碎细胞(功率 300w， 超声 3  秒，间隔 7 秒，总时间 3min )；然后 8000g ，4℃ ，离心 10min ，取上 清置于冰上待测。

3.  血清等液体：直接测定。

4.  测定步骤：

1.  分光光度计预热 30 min ，调节波长到 340 nm ，用蒸馏水调零。

2.  试剂三放在 25℃  ( 一般物种) 或者 37℃  (哺乳动物) 保温。

3.  空白管：取 1mL  石英比色皿，加入 100μL  试剂一，900μL  试剂二和 100μL 试剂三，迅速混匀后于 340nm  测定吸光度变化，记录 10 s  和 310 s  吸光度为 A1  和 A2。

4.  测定管：取 1mL  石英比色皿，加入 100μL  上清液，900μL  试剂二和 100μL 试剂三，迅速混匀后于 340nm  测定吸光度变化，记录 10 s  和 310 s  吸光度为 A3  和 A4。

注意：空白管只需测定一次。

GST 活性计算公式：

( 1).  按蛋白浓度计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH  结合为1 个酶活单位。

GST  ( nmol/min/mg prot ) =[(A4 －A3) － (A2-A1)]÷ε÷d ×109 ×V  反 总 ÷(Cpr×V样)÷T=230×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr

(2) .  按样本质量计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每克样品每分钟催化 1nmol/L CDNB  与 GSH  结合为 1 个酶活单位。

GST  ( nmol/min/g) =[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d ×109 ×V  反总÷(W×V  样÷V  样 总)÷T=230×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W

(3) 按细胞数量计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每 104  个细胞每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH  结合为 1  个酶活单位。

GST  (nmol/min/ 104cell) =[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d ×109 ×V  反总÷(细胞数量×V 样÷V  样总)÷T=230×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷细胞数量

(4) 按液体体积计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每毫升液体每分钟催化 1nmol/L CDNB  与GSH  结合为 1  个酶活单位。

GST  (nmol/min/mL) =[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d ×109 ×V  反总÷V  样÷T = 230×[(A4－A3)－(A2-A1)]

ε ： 产物摩尔消光 系数 ， 9.6×103L/mol /cm ； d ：  比色皿光径 ，  1cm ；  106 ： 1mol=1×106 μmol；V  反总：反应体系总体积，1100μL=0.0011 L；Cpr：上清液蛋 白质浓度 ( mg/mL) ， 需要另外测定；V  样 ：加入反应体系中上清液体积， 100μL=0. 1 mL；V  样总：加入提取液体积，1mL；W ，样本质量，g；T ：反应 时间 (min )，5min。

注意事项

1.  样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力；

2.  细胞中 GST  活性测定时，细胞数目须在 300  万-500  万之间，细胞中 GST 的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞；

3.  本法测定 GST  活性的线性范围可达 76 μmol/min /L，测定前先用 1~2  个样做预实验，如 5min  内反应不成线性，须对样品用蒸馏水稀释，计算结果乘以稀释倍数；

4.  测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在 25℃或者 37℃  (哺乳动物)。

保存条件

2-8℃保存

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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