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丙二醛(MDA)含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

产品信息

产品简介

测定意义：

氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列 复杂的化合物，其中包括 MDA 。通过检测 MDA  的水平即可检测脂质氧化的 水平。

测定原理：

MDA  与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在 532nm 有最大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量； 同时测定 600nm 下的吸光度，利用 532nm 与 600nm  下的吸光度的差值计算 MDA  的含量。

产品内容

使用方法

正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定

需自备的仪器和用品：可见分光光度、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

MDA  提取：

1 、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 (104 个)：提取液体积 (mL) 为 500~ 1000：1  的比例 (建议 500  万 细菌或细胞加入 1mL  提取液) ，超声波破碎细菌或细胞 (冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30  次)；8000g 4℃离心 10min ，取上清，置 冰上待测。

组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~ 10  的比例(建议称取约 0. 1g 组织，加入 1mL  提取液)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min ，取上清，置 冰上待测。

2 、血清 (浆) 样品：直接检测。

测定步骤：

1 、吸取 0.6mL  试剂一于 1.5mL  离心管中，再加入 0.2mL  样本,  混匀。

2 、95℃水浴中保温 30min (盖紧，防止水分散失)，置于冰浴中冷却，10000g， 25℃ ，离心 10min。

3 、吸取上清液于 1mL  玻璃比色皿中，测定 532nm  和 600nm  处的吸光度， 记为 A532  和 A600 ，ΔA= A532-A600。

MDA  含量计算：

1 、血清 (浆) 中 MDA 含量的计算：

MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V  反总÷(ε×d)×109]÷V  样=25.8×ΔA 2 、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算

(1) 按照蛋白浓度计算

MDA  含 量 (nmol/ mg prot)=[ ΔA×V  反 总 ÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V  样)=25.8× ΔA ÷Cpr

(2) 按照样品质量计算

MDA   含 量 (nmol/g   鲜 重 )=[  ΔA×V   反 总 ÷(ε×d)×109]÷(W  ×V   样 ÷V   样 总)=25.8×ΔA ÷W

(3 )  按照细菌或细胞密度计算：

MDA    含 量 (nmol/104)=[   ΔA×V    反 总 ÷(ε×d)×109]÷(500×V    样 ÷V    样 总)=0.0516×ΔA

V  反总：反应体系总体积，  8×10-4 L；ε：丙二醛摩尔消光系数，155×103L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V  样：加入样本体积，0.2 mL；V  样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细 胞或细菌总数，500  万。

注意事项

临用前注意试剂一是否完全溶解，如未溶解，可以 70℃加热，并振荡以促进溶解。

保存条件

2-8℃保存

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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