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过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒说明书

微量法

产品信息

产品简介

测定意义：

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的 H2O2 清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

测定原理：

H2O2 在 240nm  下有特征吸收峰，CAT  能够分解 H2O2 ，使反应溶液 240nm  下 的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出 CAT  活性。

产品内容

使用方法

粗酶液提取：

1 、细菌、细胞或组织样品的制备

收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清:  按照每 500 万细菌或细胞加 入 1ML  提取液，超声波破碎细菌或细胞(功率 20%或 200W，超声 3 秒，间隔 10  秒。重复 30  次): 8000g 4℃离心 10  分钟，取上清，置冰上待测。称取约 0. 1g 组织，加入 1mL  提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10  分钟，取上清，置 冰上待测。

2 、血清(浆)  样品:直接检测。

测定步骤：

1 、  分光光度计或酶标仪预热 30min ，调节波长至 240nm  处，蒸馏水调零。

2、测定前将 CAT  检测工作液 37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)水浴 10min。

3 、加入 10μL  样本和 190μL 工作液，混匀 5s 或在酶标仪上振动 5s 并立即计 时，记录 240nm  下的初始吸光值 A1  和 1min  后的吸光值 A2。计算ΔA=A1-A2

CAT 活性计算公式 (用石英比色皿)：

1 、血清(浆) CAT  活力的计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一 个酶活力单位

CAT (U/mL) =反应总体积÷样本体积÷反应时间÷H2O2 消光系数 (43.6x10-3)x ΔA=459x ΔA

2 、  组织 CAT  活力计算:

( 1)  按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一 个酶活力单位。

CAT (U/mg prot) = 反 应 总 体 积 ÷ 样 本 体 积 ÷ 反 应 时 间 ÷ H2O2  消 光 系 数 (43.6x10-3)x ΔA÷蛋白质浓度 (mg/mL) =459x ΔA÷蛋白质浓度 (mg/mL)

(2)  按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT (U/g   鲜 重 ) = 反 应 总 体 积 ÷ 样 本 体 积 ÷ 反 应 时间 ÷ H2O2  消 光 系 数 (43.6x10-3)x ΔA÷样本鲜重 (g/mL) =459x ΔA÷样本鲜重 (g/mL)             3 、细菌或细胞中 CAT  活力计算:

单位的定义:每 1  万个细菌或细胞在每分钟反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降 解定义为一个酶活力单位。

CAT  (U/ 104cell)  = 反 应 总 体 积 ÷ 样 本 体 积 ÷ 反 应 时 间 ÷ H2O2  消 光 系 数 (43.6x10-3)x ΔA÷细胞密度 (104cell/mL) =0.917x ΔA

V 反总:反应体系总体积，2x10-4L;   ε : NADH  摩尔吸光系数，4.36x104L/mol/cm; d:  比色皿光径，1cm; V 样:加入样本体积，0.01ml; V  样总:  加入提取液体积，1ml:

T:  反应时间，1min。W ，样本质量，g; Cpr:  上清液蛋白浓度，mg/ml; 500:  细胞 或细菌总数，500  万。

CAT 活性计算 (用 96 孔板)：

1 、  血清(浆) CAT  活力的计算:

单位的定义:  每毫升血清(浆)  在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为 一个酶活力单位。

CAT (U/mL) =反应总体积÷样本体积÷反应时间÷ H2O2 消光系数  (4.36x104 ) X ΔA=918xΔA

2 、组织 CAT  活力计算:

( 1)    按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg  组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为 一个酶活力单位。

CAT(U/mg prot) = 反 应 总 体 积 ÷ 样 本 体 积 ÷ 反 应 时 间 ÷ H2O2  消 光 系 数 (4.36x104 ) X ΔA÷蛋白质浓度(mg/mL)=918xΔA÷蛋白质浓度 (mg/mL)

(3)  按样本鲜重计算:单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

(4)  CAT (U/g mass) = 反应总体积÷样本体积÷反应时间÷ H2O2  消光系数 (4.36x104 ) X ΔA÷样本鲜重 (g/mL)=918xΔA÷样本鲜重(g/mL)                            

3 、细菌或细胞中 CAT  活力计算:

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在每分钟反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降 解定义为一个酶活力单位。

CAT(U/ 104cell) =反应总体积÷样本体积÷反应时间÷ H2O2 消光系数 (4.36x104 ) X ΔA÷细胞密度 ( 104cell /mL)=1.836xΔA

V 反总:反应体系总体积，2X10-4L:   ε :NADH  摩尔吸光系数，4.36X104L/mol/m: d:  比色光径，0.5cm:V 样:加入样本体积，0.0lml:V 样总:  加入提取液体积，1ml; T:  反应时间，1min 。W ，样本质量，g: Cpr:上清液蛋白浓度，mg/ml: 500:  细胞 或细菌总数，500  万

注意事项

1 、预实验如果发现酶活性过高(其实 OD 值过大) ，可用提取液适当稀释样品。

2 、如果酶活性过低，延长反应时间(3 分钟之内) ，并将反应时间准确代入计算公式。

保存条件

2-8℃保存

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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