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过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒说明书

 分光光度法

产品信息

产品简介

测定意义：

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的 H2O2 清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

测定原理：

H2O2 在 240nm  下有特征吸收峰，CAT  能够分解 H2O2 ，使反应溶液 240nm  下 的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出 CAT  活性。

产品内容

使用方法

正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL  石英 比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

1 、细菌、细胞或组织样品的制备

细菌或培养细胞:  收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清:  按照细菌或细胞 数量(104 个):提取液体积 (ml)为 500- 1000:1  的比例(建议 500  万细菌或细胞加入 1ml  提取液) ，超声波破碎细菌或细胞(功率 20%或 200w ，超声 3  秒，间 隔 10  秒。重复 30  次) ; 8000g4℃离心 10  分钟，取上清，置冰上待测。组织:   按照组织质量 (g):  提取液体积 (ml)  为 1: 5- 10  的比例(建议称取约 0. 1g  组织， 加入 lmL  提取液) ，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10  分钟，取上清，置冰上 待测。

2 、血清(浆)  样品:直接检测。

测定步骤：

1 、  分光光度计预热 30min  以上，调节波长至 240nm  处，蒸馏水调零。

2 、CAT  检测工作液的配置:  用时在每瓶试剂二 ( 100μL)  中加入 20ml 试剂一， 充分混匀，作为工作液:用不完的试剂 4℃保存一周。

3、测定前将 CAT  检测工作液 37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)水浴 10min。

4 、取 1mLCAT  检测工作液于 1mL  石英比色皿中，再加入 35μL  样本，混匀 5s:  室温下立即测定 240nm  下的初始吸光值 A1  和 1min  后的吸光值 A2 。计 算ΔA=A1-A2

CAT 活性计算公式：

1 、血清(浆) CAT  活力的计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一 个酶活力单位

CAT (U/mL) =( ΔAxV  反总÷ (exd) x109)÷V  样÷T=678xΔA

2 、  组织、细菌或细胞中 CAT  活力计算:

( 1)  按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一 个酶活力单位。

CAT (U/mgprot) =(ΔAxV  反总÷ (exd) x109)÷(V 样 xCpr)÷T=678xΔA÷Cpr (2)  按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活 力单位。

CAT (U/g  鲜重) =(ΔAxV  反总÷ (exd) x109)÷(WxV  样÷V  样总)  ÷T=678xΔA ÷W

3 、按细菌或细胞中 CAT  活力计算:

单位的定义:每 1  万个细菌或细胞在每分钟反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降 解定义为一个酶活力单位。

CAT  (U/ 104cell)  =(  ΔAxV   反 总 ÷  (exd)  x109)  (500xV   样 ÷ V   样 总 )   ÷ T= 1.356xΔA

V 反总:反应体系总体积，1.035x10-3L; E: NADH  摩尔吸光系数，4.36x104L/mol/cm; d:  比色光径，1cm; V 样:加入样本体积，0.035ml; V  样总:  加入提取液体积，1ml: T:  反应时间，1min。W ，样本质量，g; Cpr:  上清液蛋白浓度，mg/ml; 500:  细胞 或细菌总数，500  万。

保存条件

2-8℃保存

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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