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乳酸脱氢酶试剂盒（LDH）说明书

微量法

产品信息

产品简介

测定意义：

LDH  (EC 1. 1. 1.27) 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途 径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着 NAD+/NADH  之间互 变。

测定原理：

LDH  催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与 2, 4 -  二硝基苯肼作用 生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

产品内容

使用方法

正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式 移液器、微量石英比色皿/96  孔板、研钵、冰和蒸馏水。

样品测定的准备：

1 、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或 细胞数量 (104 个)：提取液体积 (mL) 为 500~ 1000：1  的比例 (建议 500  万 细菌或细胞加入 1mL  提取液) ，超声波破碎细菌或细胞 (冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30  次)；8000g 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~ 10  的比例(建议称取约 0. 1g 组织，加入 1mL  提取液)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min ，取上清，置 冰上待测。

2 、血清 (浆) 样品：直接检测。

测定步骤：

1 、分光光度计或酶标仪预热 30min  以上，调节波长至 450nm ，蒸馏水调零。

2 、样本测定 (在 EP 管中加入下列试剂)

充分混匀，25℃室温静置 3  分钟，450 nm  下测定吸光度，计算 ΔA=A  测定管 -A  对照管。每个测定管需要设一个对照管。

LDH  活力单位的计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归曲线，  y = 0.725x (x  为标准品浓度，umol/mL；y  为对吸光度)。

2 、血清 (浆) LDH  活力的计算

单位的定义：每 mL  血清 (浆) 每分钟催化产生 1nmol  丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH  (nmol/min /mL) =ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA

3 、细胞、细菌和组织中 LDH  活力的计算

(1) 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg  组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol  丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH  (nmol/min /mg prot) =[ΔA÷0.725×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103=92×ΔA÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司 BCA  蛋白质含量测定试剂盒。

(2)  按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g  组织每分钟催化产生 1nmol  丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH  (nmol/min /g  鲜重) =[ΔA÷0.725×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103=92×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1  万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol  丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH  (nmol/min / 104cell) = [ΔA÷0.725×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103=0. 184×ΔA÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，1 mL；T ：反

应时间，15 min ；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或 细菌总数，500  万；103 ：1umol/mL= 103nmol/mL。

b.使用 96  孔板测定的计算公式如下：

1、标准条件下测定的回归曲线，  y = 0.3625x (x  为标准品浓度，umol/mL；y  为对吸光度)。

2 、血清 (浆) LDH  活力的计算

单位的定义：每 mL  血清 (浆) 每分钟催化产生 1nmol  丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH  (nmol/min /mL) =ΔA÷0.3625÷T×103= 184×ΔA

3 、细胞、细菌和组织中 LDH  活力的计算

(1) 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg  组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol  丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH  (nmol/min /mg prot) =[ΔA÷0.3625×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103= 184×ΔA÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司 BCA  蛋白质含量测定试剂盒。

(2)  按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g  组织每分钟催化产生 1nmol  丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH  (nmol/min /g  鲜重) =[ΔA÷0.3625×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103= 184×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1  万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol  丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH(nmol/min / 104cell) = [ΔA÷0.3625×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103=0.368×ΔA÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，1 mL；T ：反应时间，15 min ；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或 细菌总数，500  万；103 ：1umol/mL= 103nmol/mL。

保存条件：

2-8℃保存

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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