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土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒(ALP) 说明书

可见分光光度法

产品信息

产品简介

测定意义：

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土 壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的 指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH  显著影响。通常按 照其最适 pH  范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

测定原理：

碱性环境中，S-AKP/ALP  催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测 定酚的生成量即可计算出 S-AKP/ALP  活性。

产品内容

使用方法

正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、 可调式移液器、1mL  玻璃比色皿、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。

催化反应：

称取风干混匀土壤约 0. 1g，加入 50μL  甲苯(自备)，轻摇 15min；加 400μL  试 剂一并且摇匀后，置于 37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应 24h；到时后迅 速加入 1mL  试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心 10min， 取上清液置于冰上待测。

显色反应：

1.  分光光度计预热 30 min ，调节波长到 660 nm ，蒸馏水调零。

2.  空白管：取 1mL  玻璃比色皿，加入 50 μL 蒸馏水，100μL 试剂三，20μL 试 剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 830μL，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm  测定吸光度，记为 A 空白管。

3.  标准管：取 1mL  玻璃比色皿，加入 50μL 标准液，100μL 试剂三，20μL 试 剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 830μL，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm  测定吸光度，记为 A 标准管。

4.  测定管：取 1mL  玻璃比色皿，加入 50μL 上清液，100μL  试剂三，20μL  试 剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 830μL，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm  测定吸光度，记为 A 测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

S-ALP 活性计算公式：

S-ALP  活性计算公式：

活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放 1nmol  酚为 1  个酶活单位。

S-AKP/ALP (nmol/d/g) =[C  标准液×(A  测定管－A  空白管)÷(A  标准管－A  空白管)]×V  总÷W÷T= 725×(A  测定管－A  空白管)÷(A  标准管－A  空白管)÷W C  标准液：0.5μ mol/L；V  总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T ：催化反应时间，24 h=1 d。

保存条件

2-8℃保存

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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