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氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量测试盒  (40×)说明书

（微量法）

产品信息

产品简

介测定意义：

GSH/GSSG  是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此，测定细胞内 GSH  和 GSSG  含量以及 GSH/GSSG  比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态， 也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。

测定原理：

利用 2-VP  法测 GSSG  含量。

产品内容

使用方法

正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定

需自备的仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96  孔板、和蒸馏水。

粗酶液提取：

1.  组织：按照组织质量 (g)：试剂一体积(mL)为 1 ：5~ 10  的比例 (建议称取 约 0. 1g  组织，加入 1mL  试剂一) 进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min ，取 上清液 (如上清不清澈，再离心 3min ) 100μL ，加 900μL 的蒸馏水混匀待测。

2.  细菌、真菌：按照细胞数量 (104   个)：试剂一体积 (mL) 为 500~ 1000：1  的 比例 (建议 500  万细胞加入 1mL  试剂一)，冰浴超声波破碎细胞 (功率 300w， 超声 3  秒，间隔 7  秒，总时间 3min )；8000g 4℃离心 10min ，取上清液 (如 上清不清澈，再离心 3min ) 100μL ，加 900μL 的蒸馏水混匀待测。

3.  血清等液体：直接测定。

测定操作：

1.  分光光度计/酶标仪预热 30 min ，调节波长到 412 nm ，蒸馏水调零。

2.  试剂三置于 25℃  ( 一般物种) 或者 37℃  (哺乳动物) 水浴中保温 30min。

3.  标准管：取 0.5mL EP  管，加入 20μL  标准液，1μL  试剂二，盖紧后混匀， 置于 37℃水浴 30min；开盖后依次加入 140μL  试剂三，40μL  试剂四，2μL  试 剂五，迅速混匀后，测定 30s 和 150s  光吸收 A1  和 A2。

4.  测定管：取 0.5mL EP  管，加入 20μL  上清液，1μL  试剂二，盖紧后混匀， 置于 37℃水浴 30min；开盖后依次加入 140μL  试剂三，40μL  试剂四，2μL  试 剂五，迅速混匀后，测定 30s 和 150s  光吸收 A3  和 A4。

注意：标准管只需要测定一次。

GSSG 含量计算公式：

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

( 1)  按蛋白浓度计算

GSSG  (μmol/mg prot) =C  标准液×  (A4－A3) ÷(A2－A1) ×V  反总÷(V  样×Cpr) =30.45×  (A4－A3) ÷(A2－A1)÷Cpr

(2)  按样本质量计算

GSSG (μmol/g) =C  标准液× (A4－A3) ÷(A2－A1) ×V  反总÷(V  样÷V  样总×W)=30.45×  (A4－A3) ÷(A2－A1)÷W

(3)  按细胞数量计算

GSSG  (μmol/104cell) =C  标准液×  (A4－A3) ÷(A2－A1) ×V  反总÷(V  样÷V  样总×细胞数量=30.45×  (A4－A3) ÷(A2－A1)÷细胞数量

(4)  按照液体体积计算

GSSG  (μmol/mL) =C  标准液×  (A4－A3) ÷(A2－A1) ×V  反总÷V  样 =30.45×  (A4－A3) ÷(A2－A1)

C  标准液：3μmol/mL GSSG；W：样品质量，g；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL； V  反总：反应总体积，0.203mL；V  样：反应中加入样本体积，0.02mL；V  样总：加入提取液体积，1mL

b.使用 96  孔板测定的计算公式如下

( 1)  按蛋白浓度计算

GSSG  (μmol/mg prot) =C  标准液×  (A4－A3) ÷(A2－A1) ×V  反总÷(V  样×Cpr) =30.45×  (A4－A3) ÷(A2－A1)÷Cpr

(2)  按样本质量计算

GSSG (μmol/g) =C  标准液× (A4－A3) ÷(A2－A1) ×V  反总÷(V  样÷V  样总×W) =30.45×  (A4－A3) ÷(A2－A1)÷W

(3)  按细胞数量计算

GSSG  (μmol/104cell) =C  标准液×  (A4－A3) ÷(A2－A1) ×V  反总÷(V  样÷V  样 总×细胞数量=30.45×  (A4－A3) ÷(A2－A1)÷细胞数量

(4)  按照液体体积计算

GSSG  (μmol/mL) =C  标准液×  (A4－A3) ÷(A2－A1) ×V  反总÷V  样 =30.45×  (A4－A3) ÷(A2－A1)

C  标准液：3μmol/mL GSSG；W：样品质量，g；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL， V  反总：反应总体积，0.203mL；V  样：反应中加入样本体积，0.02mL；V  样 总：加入提取液体积，1mL

注意事项

1.  提取过程中去掉蛋白质，所以提取液不能用于测定蛋白含量。

2.  临用前配制的试剂配好后 4℃保存，3  天内使用完毕。

3.  最低检出限为 1mmol/L。

保存条件

2-8℃保存

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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