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过氧化物酶(POD)检测试剂盒说明书

（微量法）

产品信息

产品简介

测定意义：

POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧 化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

测定原理：

POD  催化 H2O2 氧化特定底物，在 470nm  有特征光吸收。

产品内容

使用方法

正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96  孔板、研钵、冰和蒸馏水

粗酶液提取：

1 、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~ 1000：1  的比例（建议 500  万细菌或细胞加入 1mL  提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30  次）；8000g 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~ 10  的比例（建议称取约 0. 1g 组织，加入 1mL  提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。

2 、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1 、 分光光度计或酶标仪预热 30min  以上，调节波长至 470nm ，蒸馏水调零。 

2 、测定前将试剂一、二和三在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）放置 10min以上。

3 、 样本测定表

在微量石英比色皿或 96  孔板中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录 470nm  下 30s时的吸光值 A1  和 1min30s  后的吸光值 A2。计算 ΔA ＝A2-A1。

注意：

1 、若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液， 在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）放置 10min   以上，测定时加入 10µL样本和 240µL  混合液测定。

2 、如果 ΔA  小于 0.005 ，可将反应时间延长到 5min 。如果 ΔA  大于 0.5 ，可将样本用提取液稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。

POD 活性计算：

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1 、血清（浆）POD  活性

单位定义：每 mL  血清（浆）在每 mL  反应体系中每分钟 A470  变化 0.01  为一个酶活力单位。

计算公式：POD（U/mL）=ΔA×V  反总÷V  样÷0.01÷T =2500×ΔA

2 、组织、细菌或细胞 POD  活性

(1)  按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg  组织蛋白在每 mL  反应体系中每分钟 A470  变化 0.01  为一个酶活力单位。

POD（U/mg prot）= ΔA×V  反总÷（V  样×Cpr）÷0.01÷T =2500×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位定义：每 g  组织在每 mL  反应体系中每分钟 A470  变化 0.01  为一个酶活力单位。

POD（U/g  鲜重）= ΔA×V  反总÷(W× V  样÷V  样总)÷0.01÷T =2500×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算

单位定义：每 1  万个细菌或细胞在每 mL  反应体系中每分钟 A470  变化 0.01为一个酶活力单位。

POD（U/104 cell）= ΔA×V  反总÷(500×V  样÷V  样总)÷0.01÷T =5 ×ΔA

V  反总：反应体系总体积，0.25mL； V  样：加入样本体积，0.01mL；V  样总：

加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；

W：样本质量；500：细菌或细胞总数，500  万。

用 96  孔板测定的计算公式如下

1 、血清（浆）POD  活性

单位定义：每 mL  血清（浆）在每 mL  反应体系中每分钟 A470  变化 0.005  为一个酶活力单位。

POD（U/mL）=ΔA×V  反总÷V  样÷0.005÷T =5000×ΔA

2 、组织、细菌或细胞 POD  活性

(1)  按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg  组织蛋白在每 mL  反应体系中每分钟 A470  变化 0.005  为一个酶活力单位。

POD（U/mg prot）= ΔA×V  反总÷（V  样×Cpr）÷0.005÷T =5000×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位定义：每 g  组织在每 mL  反应体系中每分钟 A470  变化 0.005  为一个酶活力单位。

POD（U/g  鲜重）= ΔA×V  反总÷(W× V  样÷V  样总)÷0.005÷T =5000×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算

单位定义：每 1  万个细菌或细胞在每 mL  反应体系中每分钟 A470  变化0.005  为一个酶活力单位。

POD（U/104 cell）= ΔA×V  反总÷(500×V  样÷V  样总)÷0.005÷T = 10×ΔA

V  反总：反应体系总体积，0.25mL； V  样：加入样本体积，0.01mL；V  样总：

加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；

W：样本质量；500：细菌或细胞总数，500  万。

保存条件

2℃-8℃保存

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

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