首先你需要一株需要提前膜蛋白的细胞、NP40、氯化钠、Tris-Hcl、SDS、脱氧胆酸钠和PMSF,东西齐全了,就开始配裂解液吧。下面是配方.
RIPA Buffer For 100ml:
150mM NaCl 5ml 3M NaCl
50mM TrisHCl pH8.0 5ml 1M TrisHCl pH8.0
1mM EDTA pH8.0 0.2ml 0.5M EDTA pH8.0
1%NP-40 5ml 20% NP-40
0.1% SDS 1ml 10% SDS
0.1% Deoxycholate 100mg Deoxycholate
那东西都齐全了,开始讲步骤了!
1.收集细胞,将1000转离心收集的(最好低温哦)细胞悬于裂解液中20分钟;
2.就12000离心吧,收集沉淀哦;
3.在加入裂解液;
4.然后超声10-15次,每次2秒,间隔15秒;
5.再12000低温离心,收集上清,开始做实验咯
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